服務簡介
多蛋白復合物參與幾乎所有細胞過程,其功能不僅依賴于單個蛋白質的理化性質,還取決于與伴侶蛋白的相互作用狀態(tài)。在原核表達系統(tǒng)中,異源蛋白常因缺乏輔因子或翻譯后修飾導致折疊錯誤、活性喪失,而共表達技術可通過在大腸桿菌中同時表達多個蛋白質,模擬天然相互作用環(huán)境,從而獲得正確折疊、具有生物活性的蛋白復合物。該技術已廣泛應用于生化分析、結構生物學及高通量篩選等領域,是替代酵母、哺乳動物細胞等復雜表達系統(tǒng)的高效低成本方案。
服務內容
階段 | 步驟 | 步驟 |
載體設計與載體構建 | 1. 選擇共表達策略(單載體/多載體系統(tǒng)) 2. 設計啟動子、標簽及復制起點組合 3. 進行目的基因克隆、載體酶切連接及測序驗證,整合標簽與調控元件 | 1-2周 |
宿主準備與陽性克隆篩選 | 1. 選擇適配菌株 2. 制備培養(yǎng)基及誘導劑 3. 通過質粒轉化宿主細胞 4. 結合抗性篩選與PCR驗證獲得陽性克隆 | 1周 |
表達條件優(yōu)化與大規(guī)模培養(yǎng) | 1. 采用24/96孔板進行小規(guī)模表達,優(yōu)化誘導條件 2.通過搖瓶或發(fā)酵罐擴大培養(yǎng) | 1周 |
蛋白純化與鑒定 | 1. 采用超聲/溶菌酶裂解細胞,親和層析純化并去除雜蛋白 2. 通過SDS-PAGE、Western blot驗證產(chǎn)物,結合活性測定確認復合物功能 | 1周 |
服務優(yōu)勢
1. 高效性:可同時表達2-10個蛋白,快速獲得天然復合物,避免體外重組的繁瑣步驟;
2. 低成本:依托大腸桿菌快速生長特性,培養(yǎng)及試劑成本顯著低于酵母或哺乳動物細胞系統(tǒng);
3. 高活性:模擬天然相互作用環(huán)境,提高蛋白折疊正確性及復合物穩(wěn)定性,活性保留率達 60%-90%;
4. 靈活性:支持單載體 / 多載體系統(tǒng)切換,可通過標簽組合實現(xiàn)多蛋白同步純化;
5. 可擴展性:從微克級小規(guī)模驗證到克級大規(guī)模制備,滿足不同研究需求。
應用領域
1. 結構生物學:解析蛋白復合物三維結構(如通過冷凍電鏡或X射線晶體學);
2. 藥物研發(fā):篩選靶向蛋白-蛋白相互作用的小分子抑制劑(如癌癥相關復合物靶點);
3. 生化機制研究:分析酶-底物、受體-配體等相互作用的動力學參數(shù);
4. 疫苗開發(fā):表達病毒衣殼蛋白復合物(如HPV L1/L2),用于疫苗制備;
5. 工業(yè)酶工程:共表達酶及其輔因子,提高催化效率(如氧化還原酶與輔酶再生系統(tǒng))。
服務流程
雙方溝通一致后確定實驗方案,確定服務要求-簽訂合同-預付款-開始實驗-成果交付
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參考文獻
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